蛋白质组定量分析
Quantitative analysis of proteomics

定量蛋白质组学是一种用来检测样品中蛋白相对/绝对含量的分析化学技术,而质谱则是实现该技术依赖的一个重要手段。基于质谱的蛋白质组学主要分为两大类,即标记定量和非标记定量。其中,标记定量常用的是iTRAQ和TMT两种试剂盒,其均是利用质谱检测报告离子的信号相应强度来对蛋白进行相对定量的。而非标记定量的原理则是对被检测到的离子峰强度进行积分,以积分面积进行相对定量的。近几年备受关注的数据非依赖采集(Data Independent Acquisition)方式则是传统非标记定量的升级版,能够扫描到更全面地碎片信息,不会造成低丰度蛋白的丢失。

产品介绍
The service content
  • iTRAQ 同位素标记定量技术
  • TMT 同位素标记定量技术
  • label free非标记定量技术
  • DIA技术
实例分析

由JAK2V617F变化引起的蛋白质组学分析

基本信息
材料:Ba/F3细胞系                                                                        主要技术:SILAC、iTRAQ
期刊:Leukemia.                                                                             影响因子:12.105

 

文章摘要
超90%的真红细胞增多症患者都存在JAK2,JAK2V617F的突变,这些突变基因的蛋白产物为临床治疗提供了重要的潜在靶点,但是目前JAK2抑制剂在临床治疗上并不成功。为了提高临床疗效和加深这些原癌基因在造血细胞中的作用,文章通过SILAC技术和iTRAQ技术检测到了受JAK2V617F基因影响的5000多种蛋白和2000多个核内磷酸化位,这些蛋白影响了p53和MYC信号通路,并通过JAK2V617F突变的临床病人的原代CD34+细胞进行了深入验证,同时抑制MYC和上调p53能够有效的清除JAK2V617F阳性的CD34+细胞,这为临床治疗提供了另一种思路。

 

方法流程

 

 

小鹿推荐
本文是通过蛋白质组学研究分子机理的典型文章。不同于一般研究的地方在于采用了两种标记蛋白质组学联合检测和分析,同时研究对象不局限于全细胞,还扩展至细胞核,检测的蛋白不局限于普通蛋白,同时也检测磷酸化修饰蛋白。着手点比较多,通过对数据的整合分析,层层递进,蛋白质组学研究方法可以很好满足此类研究的需求。

 

文献来源
Stella Pearson. et al., Proteomic analysis of JAK2V617F induced changes identifies potential new combinatorial therapeutic approaches. 2017, Leukemia.