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Nature Methods 关注技术 | DIA+PRM技术在线讲座开课啦

 

 

随着质谱仪器的不断更新换代,蛋白组学的技术也不断的革新,从最早的2-D电泳技术到基于LC-MS/MS的蛋白定性;从Label free 技术到标记定量iTRAQ/TMT技术以及时下备受推崇的DIA/SWATH技术、PRM/MRM技术,每一次的技术革新都使得蛋白组学研究更上一阶。蛋白DIA定量分析技术也被《Nature Methods》杂志评为最值得关注的技术之一。PRM技术是基于质谱的靶向验证蛋白组学技术,完美的替代了基于抗体的Western blot、ELISA等。

 

这么前沿火热的技术也引发了所有蛋白组学研究相关的科研家们关注,鹿明生物作为国内早期开展以蛋白组和代谢组为基础的多层组学整合实验与分析的团队,也是早在2017年就正式推出了蛋白组学DIA+PRM技术服务。在这2年以来,鹿明生物携手蛋白组学PCT-SWATH/DIA技术开创者、鹿明生物科技顾问郭天南特聘研究员,不断优化技术流程。目前鹿明生物已处理近2000例DIA+PRM项目,拥有丰富的项目经验。应广大客户的要求,我们特此将精心开设一场DIA+PRM技术讲座。

 

DIA+PRM技术讲座

 

时间:7月26日晚上19:00-20:00

地点:线上讲座

主讲人:徐燕

主讲人简介:上海交通大学系统生物医学研究院毕业,研究方向为疾病蛋白质组学,鹿明生物蛋白部主管,专注于蛋白组技术研究,协助科研伙伴在Proteomics、BMC Genomics等杂志发表研究论文若干篇,在蛋白组技术尤其是DIA和PRM实验与分析技术方面经验丰富。

 

 

讲座简介:1、蛋白组学技术概括 2、DIA技术+PRM技术简介 3、技术研究思路及文献挖掘   4、DIA、PRM技术研究流程    5、投稿推荐等干货内容

 

 

欢迎添加微信申请免费讲座和课件

 

DIA技术原理

DIA技术是先利用常规DDA质谱检测技术分析建立图谱库,之后采用DIA方法进行质谱数据采集,从而实现对样品中蛋白质的定性及定量,不同于传统的DDA技术,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测,因此可以无遗漏地获得样本中所有离子的全部碎片信息,数据利用度大大提高,缺失值更少。因此,DIA技术更适合于大样本量、复杂体系的蛋白检测。

DIA技术流程

 

DIA优势

 

 

DIA技术是基于质谱的新一代蛋白组学技术,DIA技术采用数据非依赖性采集扫描模式,摆脱了传统DDA(代表性技术:iTRAQ/TMT)扫描的偏好性制约,可以无遗漏地获得样本中所有离子的碎片信息,以达到样本数据的完整性。

 

DIA技术较传统的iTRAQ/TMT/Labelfree蛋白组技术而言,具有如下优势

1. 保证了数据的完整性,缺失值少。 

2. 克服了iTRAQ/TMT的通量低的限制。 

3. 提高了低丰度蛋白的检出率。 

4. 鹿明生物基于Thermo公司的QE-HF高端质谱,检出率提升20%以上。

 

PRM技术原理

PRM:平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring) 是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行相对或绝对定量。PRM技术是基于质谱的靶向验证蛋白组学技术,完美的替代了基于抗体的Western blot、ELISA等。PRM技术运用平行反应监测技术特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子并进行定量,可以有效排除干扰离子,提高蛋白质的定量准确性。

PRM靶向定量蛋白质组学分析基本流程

 

PRM优势

 

PRM技术较传统的Western blot、ELISA等靶向蛋白验证技术具有如下优势:

1. 克服了抗体制备难,买不到抗体的困境。  

2.PRM技术与DIA/iTRAQ/TMT技术都是基于质谱技术,对于组学的结果验证率有很大改善。 

3. 一次针对30个左右的目的蛋白进行精确靶向定量。

 

 PRM技术优势 

 

PRM和DIA各自都有这么多优势,那将这2个前沿的技术合起来使用会是什么样的效果呢?显而易见,合起来使用,你不仅可以享受到给各自的优势,还具备PRM验证可使用DIA的数据库资源,也就是说不用重复建库,一个数据库就搞定(PS:省了一笔重复建库费用);另外,PRM验证让您不再忧愁各种途径找定制化抗体。

那么DIA+PRM技术能够适用哪些研究呢?答案是各领域均适用,尤其适合临床医学样本,强力推荐。

 

DIA+PRM适用领域

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