TMT标记定量蛋白质组学

 
 
TMT同位素标记定量技术
 
TMT(tandem mass tags)是由Thermo公司开发的一种体外标记技术,广泛用于差异表达蛋白质分析研究中。该技术采用多重同位素标签与肽段的氨基发生共价结合反应,可实现同时对不同样品中蛋白质的定性和定量分析(目前最多可实现同时标记16个样本)。


 
 

 

 

实验原理

 

如下图所示,TMT试剂在结构上包括3个化学基团,分别是报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团特异与肽段的氨基发生共价结合反应,将TMT试剂连接到肽段上。在一级图谱中,不同样品来源于同一个蛋白质的同一个肽段由于被连接上总质量相同的完整TMT试剂而表现为一个峰。但在碰撞室内,平衡基团会发生中性丢失,而报告基团则会产生相应的报告离子(六标为126、127、128、129、130和131 Da,十标为126、127N、127C、128N、128C、129N、129C、130N、130C和131 Da,十六标为126、127N、127C、128N、128C、129N、129C、130N、130C、131N、131C、132N、132C、133N、133C、134N)。这些报告离子的强度就代表了相应样品蛋白质/肽段的强度,实现了对6个/10个/16个不同样品的同时定量。
 

 

 

 

 

 

TMT技术特点 

 

1:通量高

可一次性分析6、10、16个样品

 

2:重复性好

所有样品的分离鉴定条件一致

 

3:数据丰富

可获得所有蛋白的定性和定量信息

 

4:自动化程度高

以高分辨率液质联用为基础,自动化操作,分析速度快

 

5:定量准确

减少了样本处理、以及不同组上机造成的实验误差,因此能达到定量更准确的效果

 

6:灵敏度高

可检测到表达丰度为皮克(pg)级的蛋白,无高丰度蛋白样本(血液、脑脊液、肌肉组织、骨组织等)可检测

 
 

 

 

实验流程

 

 

 

 

 

 

 

样本类型及含量要求

 

1蛋白质提取物浓度>1ug/ul(最好是4ug/ul)蛋白总量>300μg
2细胞样品细胞量>107
3组织样品  动物组织>100mg;植物物质>200mg
4液体样本血液体积>100ul,尿液>10ml,唾液>1ml

 

 

         

         

送样要求     

       

1

在允许的条件下,实际样品准备量应适当比最低样品量多准备一些。

2

收集样品时做好分装标记,并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存,避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。

3

生物学重复的样品一定要标记清楚,建议可以用:-1、-2、-3的方式来标记。

 

 

 

 

 

仪器设备

 

Thermo Q-Exactive高分辨质谱 

 

 

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