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生物药表征研究——单克隆抗体表征分析方法之一级结构

 

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单克隆抗体
 

单克隆抗体(mAbmoAb)是由高度一致的免疫细胞制成的抗体,这些免疫细胞是单一亲本细胞的所有克隆。单克隆抗体具有单价亲和力,因为它们结合相同的表位(抗体识别抗原的部位)。几乎任何物质,都有可能产生特异性结合该物质的单克隆抗体,然后它们可以用来检测或纯化该物质。治疗性单克隆抗体通过多种机制发挥作用,例如阻断靶分子功能、诱导细胞(表达靶标分子的细胞)凋亡或调节信号通路。
 

1975年Georges Köhler和 César Milstein成功发明杂交瘤技术,奠定了单克隆抗体药物发展的基础,并因此获得1984年诺贝尔奖。
 

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抗体药物
 

蛋白药物包括:酶类药物、抗体药物、重组疫苗、融合蛋白,其中抗体药物是最重要的蛋白药物;

根据结构,可将单克隆抗体分为:单克隆抗体(鼠源单抗、嵌合单抗、人源化单抗、全人源单抗)和抗体偶联药物、多特异性抗体、抗体融合蛋白、小分子抗体(Fab、ScFv、VHHS)等。
 

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抗体药物的设计需要根据靶点来进行,目前的热门靶向包括:PD-1/PD-L1、TNF-α、VEGF、HER-2、CD20、EGFR等。

一个靶点可对应多个药物,一个药物可对应多个疾病,所以靶点很重要。
 

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蛋白表征
 

蛋白表征指的是蛋白质的各项特性,包括结构、理化、活性等一系列内容。
 

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鹿明生物单克隆抗体研究方案
 

鹿明生物可通过LC-MS或LC-MS/MS技术进行分子量、肽谱、N糖谱检测及单抗从头测序。
 

分子量
 

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肽谱
 

肽谱是一个蛋白经酶解处理后所得最终产物通过色谱分离的指纹图谱,可为所分析的蛋白提供一个全面深入的认识。
 

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可确证蛋白多肽的理论序列与修饰及二硫键定位情况,抗体类常见修饰为脱酰胺、氧化、N端环化、C端K缺失、糖化、磷酸化、乙酰化、酰胺化、糖基化等。
 

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N糖谱
 

N糖谱糖蛋白可以参与免疫防御、细胞生长以及细胞与细胞间的粘附,而帮助介导这些功能的糖链具有无数种复杂的结构。
 

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N糖谱用于单克隆抗体的糖型结构分析,可鉴定糖型种类和相对数量。
 

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单抗从头测序
 

单抗从头测序适用于完全未知序列的样品,可获得蛋白的完整一级序列。
 

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图为单酶切结果,六酶切可增加肽段覆盖率及可信度,利用不同酶切肽段之间的互补性实现蛋白分子100%全序列的拼接。
 

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鹿明在单克隆抗体表征分析上的优势

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鹿明生物,致力于更好的生物质谱检测技术开发与应用,从组学全覆盖研究到单分子深入分析,逐步聚焦,只为实现更好的生物质谱应用;从科技服务到医药研究,打通机制研究到临床应用的全通路。鹿明生物以生物科技成就他人、造福大众。


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文章来源于鹿明生物

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