iTRAQ技术的特点
1:通量高
可一次性分析4、8个样品
2:重复性好
所有样品的分离鉴定条件一致
3:数据丰富
可获得所有蛋白的定性和定量信息
4:自动化程度高
以高分辨率液质联用为基础,自动化操作,分析速度快
5:定量准确
减少了样本处理、以及不同组上机造成的实验误差,因此能达到定量更准确的效果
6:灵敏度高
可检测到表达丰度为皮克(pg)级的蛋白,无高丰度蛋白样本(血液、脑脊液、肌肉组织、骨组织等)可检测
实验流程
样本类型及含量要求
1 | 蛋白质提取物 | 浓度>1μg/μg(最好是4μg/μg)蛋白总量>300μg |
2 | 细胞样品 | 细胞量>107个 |
3 | 组织样品 | 动物组织>100mg;植物物质>200mg |
4 | 液体样本 | 血液体积>100μg,尿液>10ml,唾液>1ml |
送样要求
1
在允许的条件下,实际样品准备量应适当比最低样品量多准备一些。
2
收集样品时做好分装标记,并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存,避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。
3
生物学重复的样品一定要标记清楚,建议可以用:-1、-2、-3的方式来标记。
送样要求
1
在允许的条件下,实际样品准备量应适当比最低样品量多准备一些。
2
收集样品时做好分装标记,并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存,避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。
3
生物学重复的样品一定要标记清楚,建议可以用:-1、-2、-3的方式来标记。
仪器设备
Sciex Triple TOF 6600质谱仪